福建省水产技术推广总站技术服务竞争性谈判公告

　　一、项目基本情况

　　项目名称：大黄鱼锥体虫病加密监测项目技术服务

　　采购方式：竞争性谈判

　　预算金额：9.06万元（人民币） 

　　最高限价（如有）：9.06万元（人民币）

　　采购需求：详见附件

　　本项目( 不接受 )联合体投标。

　　二、申请人的资格要求

　　1.满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定；

　　2.本项目的要求：（1）熟悉了解我站水生动物疫病监测、病原菌耐药性监测、CNAS实验室认可等相关工作。（2）供应商须提交以下资质证明文件：①供应商须在中华人民共和国境内注册，具有独立法人资格，并提供合格有效的法人营业执照副本复印件、税务登记证副本复印件、组织机构代码证副本复印件。若已三证合一的企业可只提供营业执照副本复印件。②提交项目报价单。③具有技术服务、技术开发等相关证明文件。

　　三、响应文件提交

　　截止时间：2025年9月18日 17点30分（北京时间）

　　地点：福建省水产技术推广总站（福建省福州市鼓楼区西洪路555号福建省水产技术推广总站五楼办公室）

　　四、开启

　　时间：2025年9月19日 10点00分（北京时间）

　　地点：福建省水产技术推广总站（福建省福州市鼓楼区西洪路555号福建省水产技术推广总站四楼会议室）

　　五、公告期限

　　自本公告发布之日起5日。

　　六、其他补充事宜

　　无

　　七、凡对本次采购提出询问，请按以下方式联系

　　名 称：福建省水产技术推广总站　　　　　

　　地址：福建省福州市鼓楼区西洪路555号　　　　　　　　

　　联系方式：陈先生 0591-87510919　　　　　　

　　福建省水产技术推广总站

　　2025年9月11日

　　附件

　　一、采购需求

　　二、服务内容、形式和要求

　　1.服务内容

　　甲方委托乙方进行如下技术服务：

　　1.1测序：包括PCR产物、菌液和质粒测序服务。

　　1.2引物合成：包括普通PCR引物合成（DNA合成，PAGE合成11-25个碱基 2OD）；荧光定量PCR引物合成（DNA合成，HPLC合成11-25个碱基 2OD）；引物修饰（DNA合成，双标记修饰 5`6-FAM，3`BHQ1 2OD、双标记修饰 5`VIC，3`BHQ1 2OD）；引物纯化（HPLC纯化 1-39个碱基 2OD）。

　　1.3 HE染色服务：

　　1.3.1脱水、透明、浸蜡：用酒精脱去组织中的水分，再用二甲苯等透明剂透明，最后用石蜡将组织包埋成硬块。

　　1.3.2切片与贴片：用切片机将蜡块切成几微米厚的薄片，贴在载玻片上。

　　1.3.3脱蜡至水：将玻片依次放入二甲苯和梯度酒精中，去除组织中的石蜡，并让组织回到水环境。

　　1.3.4染色：

　　苏木精染核：将玻片放入苏木精染液中浸泡数分钟，细胞核被染成蓝色。

　　分化与返蓝：用酸酒精溶液洗去多余的苏木精（分化），然后用弱碱性水（如Scott水）使苏木精的颜色变得更鲜明、稳定（返蓝）。

　　1.3.5伊红染胞质：将玻片放入伊红染液中浸泡较短时间，细胞质等被染成粉红色。

　　1.3.6脱水、透明、封片：再次用梯度酒精脱水，二甲苯透明，最后用中性树胶盖上盖玻片封存。

　　1.4透射电镜：

　　1.4.1样品制备

　　（1）脱水:使用梯度乙醇或丙酮进行脱水：

　　（2）树脂渗透与包埋:将样品逐步浸入环氧树脂（如Epon 812或Spurr's resin）中： 树脂:丙酮 = 1:3 → 1:1 → 3:1，最后纯树脂，每步数小时至过夜。将样品放入胶囊中，加入新鲜树脂，在60℃烘箱中聚合24-48小时，形成硬块。

　　1.4.2超薄切片

　　（1）修块：用玻璃刀或金刚石刀对树脂块进行修整，暴露出感兴趣的区域（如细胞核、线粒体等）。

　　（2）超薄切片：使用超薄切片机（Ultramicrotome）将树脂块切成厚度为50-100 nm的超薄切片。切片漂浮在水面上，用铜网（常用300目）捞起。

　　1.4.3染色（增强对比度）

　　（1）铀染：将载有切片的铜网浸泡在醋酸双氧铀（Uranyl acetate, 2%-5%）中20-30分钟（避光）。铀离子结合核酸和蛋白质，提高电子散射能力。

　　（2）铅染：再用柠檬酸铅（Lead citrate）染色5-10分钟（避免CO₂影响，可用NaOH干燥剂）。铅离子增强膜结构和细胞器的对比。

　　1.4.4透射电镜观察

　　（1）上机：将染色后的铜网放入TEM样品台，抽真空后送入镜筒。

　　（2）参数设置：加速电压：通常为80-120 kV（生物样品），材料科学中可达200-300 kV。聚焦、调整亮度和对比度，选择合适放大倍数（如5,000× 到 200,000×）。

　　（3）拍照/成像：使用数字相机系统（如CCD或CMOS）采集图像。可拍摄明场像、高分辨像或选区电子衍射（SAED）用于晶体分析。

　　1.4.5图像处理与分析：使用软件（如ImageJ、DigitalMicrograph、FIJI）进行图像增强、测量尺寸、标注结构等。分析细胞器形态、病毒颗粒、纳米材料分布等。

　　1.5扫描电镜：

　　1.5.1样品制备

　　脱水：使用梯度乙醇或丙酮进行脱水,每步 10–15 分钟，最后 100% 乙醇更换两次。

　　1.5.2干燥处理

　　冷冻干燥（Freeze-drying）:快速冷冻后升华水分，适用于某些特殊样品。

　　1.5.3样品导电处理（镀膜）

　　（1）溅射镀膜（Sputter Coating）：在样品表面喷涂一层极薄的导电金属：

　　材料：金（Au），厚度：15 nm，设备：离子溅射仪（Ion Sputter Coater）。

　　（2）碳蒸镀（Carbon Coating）：用于需要进行元素分析（如 EDS）的样品，避免金属干

　　1.5.4样品安装

　　将处理好的样品用导电胶（如碳胶或银胶）固定在铝制或铜制样品台上。确保样品与台面良好接触，避免电荷积累。

　　1.5.5上机观察（SEM 操作）

　　（1）抽真空：将样品台放入样品室，关闭舱门，启动真空系统（机械泵 + 涡轮分子泵），降至 10⁻³ ~ 10⁻⁴ Pa。

　　（2）参数设置：加速电压（kV）：5–15 kV（避免损伤）,工作距离（WD）：8–10 mm。探针电流：根据样品敏感度调节。放大倍数：从低倍（×100）逐步调至高倍（×100,000+）

　　（3）聚焦与对比度调节：使用二次电子探测器（SE Detector）获取表面形貌图像。调整聚焦、亮度和对比度，获得清晰图像。

　　（4）拍照与保存：使用数字成像系统采集图像，记录放大倍数、电压、日期等参数。

　　2.服务形式和要求

　　2.1测序

　　乙方向甲方可提供质粒、菌液、PCR产物测序服务，服务周期12小时-48小时并提交测序数据给甲方，乙方保证每次正常的3730XL测序反应能读取不少于800碱基，若出现以下情况的乙方按对应的处理方案解决。

　　2.1.1对由于甲方样品本身的原因(如GC rich、连续单一重复碱基Poly(A)、Poly(T)及其它特殊结构等造成测序反应终止或信号骤降，如待测样品中存在不止一个测序引物的结合位点而造成套峰现象等)造成测序失败或不能读到800碱基的测序反应，乙方仍然正常收费。

　　2.1.2如遇到信号衰减的情况，乙方保证调整反应条件再测一次，如测序结果没有好转，则两次按一次收费，如正常则对正常的一次收费。

　　2.1.3对于不知原因的测序反应没有信号的样品，乙方会至少进行两次实验，如果仍然失败,乙方会终止实验并通知甲方，不收费，甲方可以重新送样测序。

　　2.1.4如遇无法判断的原因导致无法正确读取所承诺的测序长度，双方友好协商解决。

　　2.2引物合成

　　2.2.1乙方按甲方要求提供的引物序列，为甲方合成引物并按要求提供引物实物及相应的包装，合成过程中双方不可随意更改引物序列。乙方收到甲方引物序列之日起，普通PCR引物合成则1-2个工作日内交货给甲方；荧光定量PCR引物合成、荧光标记、两端DNA修饰探针则4-5个工作日内交货给甲方，同时乙方向甲方提供其在完成引物合成过程中的实验报告及全部数据资料。

　　2.2.2乙方保证合成质量，合成序列准确、纯度合格。如果遇到甲方使用期间有任何问题，经过乙方核实，乙方将免费重新合成一次，但不承担额外补偿。

　　2.3 HE染色服务

　　2.3.1甲方按照乙方要求提供样品：

　　大小：建议 0.5 cm × 0.5 cm × 0.3 cm 以内，过大影响固定效果。固定液：立即放入 10% 中性缓冲福尔马林（Formalin），固定时间 24–48 小时（避免过度固定导致抗原丢失）。运输：常温或4℃保存运输，避免冻结。标记清晰：每个样本需有唯一编号，并附送样清单。

　　2.3.2甲方收到样品后按照乙方要求进行如下实验：

　　包括：脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、HE染色、封片、显微镜观察与拍照。在HE染色后提供全切片扫描，并进行面积测量、阳性率统计等定量分析。

　　2.4透射电镜

　　2.4.1甲方按照乙方要求提供样品：

　　大小：建议 1 mm³ 左右（如1×1×0.5 mm），过大影响固定渗透。固定液：立即投入 2.5% 戊二醛（溶于0.1 M磷酸缓冲液或PBS，pH 7.4）。固定时间：2–4小时（4℃），避免过度固定。清洗：用缓冲液漂洗3次，每次10分钟，去除残留戊二醛。二次固定（可选）：可再用 1% 锇酸（OsO₄） 固定1–2小时（增强膜对比度）。运输： 4℃冷藏运输，避免冻结。使用防漏离心管，标注“有毒”（含戊二醛或锇酸）。

　　2.4.2甲方收到样品后按照乙方要求进行如下实验：

　　对固定后的生物样本进行：脱水、包埋、超薄切片、染色、TEM观察。交付染色后的切片，数字电镜图像（TIFF/JPEG格式），典型视野照片（含标尺），图像分析报告（如粒径分布、膜厚度测量等）。

　　2.5扫描电镜

　　2.5.1甲方按照乙方要求提供样品：

　　大小：建议 1 mm³ 左右。固定液：使用 2.5% 戊二醛（溶于0.1 M磷酸缓冲液或PBS，pH 7.4）。固定时间：1–2小时（4℃），避免过度固定。清洗：用缓冲液漂洗3次，每次10分钟，去除残留戊二醛。

　　2.5.2甲方收到样品后按照乙方要求进行如下实验：

　　对固定后的生物样本进行：脱水、干燥、镀膜、安装、抽真空、成像、EDS分析、图像处理与交付，交付数字化电镜图像（TIFF/JPEG格式），典型视野照片（含标尺和放大倍数），EDS谱图，分析报告（如粒径分布、元素组成等）。